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細(xì)胞因子試劑盒在檢測前需要做哪些準(zhǔn)備工作
2018-10-18 瀏覽次數(shù)：2522
細(xì)胞因子試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法，用抗肝細(xì)胞生長因子(HGF)抗體包被于酶標(biāo)板上，實驗時樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的人肝細(xì)胞生長因子(HGF)與包被抗體結(jié)合，游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗肝細(xì)胞生長因子(HGF)抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素。抗肝細(xì)胞生長因子(HGF)抗體與結(jié)合在包被抗體上的人肝細(xì)胞生長因子(HGF)結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍色，加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長處測OD值，肝細(xì)胞生長因子(HGF)濃度與OD450值之間呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣品中細(xì)胞生長因子(HGF)的濃度。
細(xì)胞因子試劑盒檢測前準(zhǔn)備工作:
1. 請?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。
2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶，屬于正常現(xiàn)象，可用40℃水浴微加熱使結(jié)晶*溶解后再配制洗滌液（加熱溫度不要超過50℃，使用時洗滌液應(yīng)為室溫）。當(dāng)日使用。
3. 標(biāo)準(zhǔn)品: 于10000×g離心1分鐘，加入標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液1.0mL至凍干標(biāo)準(zhǔn)品中，旋緊管蓋，靜置10分鐘，上下顛倒數(shù)次，待其充分溶解后，用移液器將其輕輕混勻（濃度為8000pg/mL）。然后根據(jù)需要進行倍比稀釋（注：不要直接在反應(yīng)孔中進行倍比稀釋）。建議配制成以下濃度：按照稀釋方法圖例 標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液直接作為空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5mL10ng/mL的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5mL標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液的EP管中，混勻即可，其余濃度依此類推。
4. 生物素化抗體工作液：實驗前計算當(dāng)次實驗所需用量（以100μL/孔計），實際配制時應(yīng)多配制100-200μL。使用前15分鐘，以生物素化抗體稀釋液稀釋濃縮生物素化抗體(1:100)成工作濃度。當(dāng)日使用。
5. 酶結(jié)合物工作液：實驗前計算當(dāng)次實驗所需用量（以100μL/孔計），實際配制時應(yīng)多配制100-200μL。使用前15分鐘，以酶結(jié)合物稀釋液稀釋濃縮HRP酶結(jié)合物(1:100)成工作濃度。
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